江蘇吉泰肽業科技有限公司
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FITC熒光標記多肽屬于FRET肽(Fluorescence resonance energy transfer, FRET)其中一種。FRET肽是研究肽酶特異性的便利工具,其反應過程容易連續監測,為酶活性的檢測提供了一個便捷的方法。FRET肽生物學應用于:
新的蛋白水解酶的篩選和檢測。
肽酶、蛋白酶、激酶、磷酸酶的動力特征和功能特征。
多肽折疊的構象研究。
FITC熒光標記應用廣泛,為黃色結晶,zui大吸收光波長為490~495nm,zui大發射光波長520~530nm,可呈現明亮的黃綠色熒光。FITC分子中含有異硫氰基與羧基熒光素相比更具活性,在堿性(pH9.0~9.5)條件下能與肽類或者蛋白的自由氨基結合,形成FITC-多肽/蛋白結合物,從而制成熒光多肽/蛋白。
在固相多肽合成過程中,FITC可以與含有側鏈氨基的賴氨酸(Lys)、鳥氨酸(ornithine),或合成過程中的多肽N端氨基反應。當在N端標記時,建議在zui后一個氨基和FITC與氨基反應產生的硫脲鍵之間引入烷基間隔器(alkyl spacer),如氨基己酸(Ahx/Acp)。多肽兩種固相多肽合成方法(Fmoc和Boc策略合成法)zui終脫離樹脂程序,都要用到強酸TFA乃至更強的HF酸。如不引入氨基己酸(Ahx/Acp),氨基硫甲酰結構在強酸TFA中,極易進攻N末端*氨基酸的酰胺鍵,形成五元雜環(乙內酰硫脲衍生物),從多肽或者蛋白上脫落。在TFA/H2O體系中乙內酰硫脲衍生物進一步形成結構穩定的乙內酰硫氨基酸。從而連同zui后一個氨基酸從多肽或者蛋白上脫落。
引入氨基己酸(Ahx/Acp),可以有效的保護FITC熒光標記多肽的穩定性,保證后續試驗的穩定。