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多肽是什么
肽是由各種氨基酸分子之間經(jīng)脫水形成肽鍵相連的聚合型有機化合物。與高分子聚合物不同,作為肽鏈基本構(gòu)建的單體(monomer)是各種氨基酸殘基,它們的側(cè)鏈結(jié)構(gòu)各不相同。因此肽不是高分子聚合物。與蛋白質(zhì)相比,肽的共價鍵形成的鏈結(jié)構(gòu)與前者相同,但鏈長度及分子量遠遠小于前者。因此,肽不是蛋白質(zhì)。盡管如此,肽與蛋白質(zhì)之間還是存在許多相近的理化性質(zhì),如親水性、極性、二級結(jié)構(gòu)、易酶解、金屬絡(luò)合性等。從分子量大小上很難在某個準確的數(shù)值上把肽與蛋白質(zhì)區(qū)別開。至今人們習(xí)慣地按肽鏈長短進行如下的表示:
小于10個殘基為寡肽(oligopeptide)或小肽分子。10~80(或100)個殘基為多肽(polypeptide)或肽。大于80(或100)個殘基為蛋白質(zhì),也有人主張只有在150個或200個殘基以上的分子才是真正的蛋白質(zhì)。
按條件溶解多肽
若多肽不溶于純水,超聲處理有助于打碎顆粒并增加溶解度。注意:超聲處理會引起溶液發(fā)熱和多肽降解。
若多肽中包含多個堿性氨基酸,使用1~10%的乙酸水溶液;對于疏水性非常強的多肽,則使用50%乙酸。
若多肽中含有大量酸性氨基酸,可用1~10%氨溶液或乙酸乙基嗎啡或重碳酸鹽等揮發(fā)性的堿性緩沖液溶解。pH值在層析前必須調(diào)整。
異丙醇和乙腈能溶解中等大小的肽。若肽要上柱,有機溶劑的量則必須很少,否則將嚴重影響滯留時間。
若多肽合成因為含有Val、Leu、Met、Phe、Tyr、Ala等芳烴側(cè)鏈而高度疏水,或為中性肽時,DMF或DMSO等膜變性劑的使用,有助于多肽的溶解。
a. 高濃度膜變性劑通過破壞多肽的二級結(jié)構(gòu)而助溶。
b. 膜變性劑適于多肽分析液的制備,但可能會對其生物活性的研究工作造成干擾。
c. DMF是最佳變性劑(最高濃度可達30%),滴加至多肽溶解。
d. 反相層析時,DMF將與洗脫液前峰一起流出,依進樣量的多少,峰值可能很高。大多數(shù)肽能在大量DMF流出后幾分鐘內(nèi)流出,若肽鏈很小,洗脫太早,多肽的量將降低。
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