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如何溶解多肽?

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如何溶解多肽?

發布日期:2019-09-25 作者: 點擊:

我們建議在溶解之前用蒸餾水或無菌水進行小試,對于較短的寡肽(小于5aa)常常能夠直接溶解。對于其他的多肽,大多需要根據多肽的序列優化溶解條件,并測試幾種不同的溶劑,直至找到最優方法(超聲處理有助于打碎顆粒,增加溶解度)。

多肽的極性對溶解度有很大的影響:酸性的蛋白易溶解于堿性溶液,而酸性溶液則適合堿性蛋白。

可以用下表氨基酸的酸堿度值的加和來計算多肽的酸堿度:


氨基酸名稱 酸堿度賦值

氨基酸名稱

酸堿度賦值

D, E, C-terminus

-1

K, R, H, N-terminus

+1

F, I, L, M, V, W, Y, G, A, S, T, C, N, Q, P, 乙?;0坊?/span>

0

按上述原則,得分大于0為堿性多肽,得分小于0的為酸性多肽,得分為0為中性多肽。


舉例說明:


RKDEFILGASRHD: (+5) + (-4) = +1 認為是堿性多肽

EKDEFILGASEHR: (+4) + (-5) = -1 認為是酸性多肽

AKDEFILGASEHR: (+4) + (-4) = 0 認為是中性多肽


1. 對于堿性多肽,如果純水無法溶解,請嘗試10% - 30%的醋酸;如果多肽還是不溶,測試純醋酸和三氟乙酸TFA(<50 μl)來溶解,然后將多肽溶液稀釋到需要的濃度。

2. 對于酸性多肽,如果純水無法溶解,請嘗試13% 氨水(v/v)來溶解,并稀釋至所需濃度。如果多肽序列中包含半胱氨酸Cys(C),不能用氨水溶解,需使用二甲基甲酰胺(DMF)或N-甲基吡咯烷酮 (NMP)進行溶解。對于容易聚集的多肽,則選擇6M的胍鹽酸(guanidine?HCl)或8M的尿素(Urea)來溶解,然后稀釋到需要的濃度。

3. 中性多肽應選用機溶劑來溶解。首先,嘗試使用乙腈 (acetonitrile) ,或甲醇 (methanol) 或異丙醇 (isopropanol)進行溶解;對于疏水性非常強的多肽,先用少量的二甲基亞砜(DMSO)溶解,并用水稀釋到需要的濃度。同理,如果多肽序列中包含半胱氨酸Cys(C),需使用二甲基甲酰胺(DMF)或N-甲基吡咯烷酮 (NMP)進行溶解。對于容易聚集的多肽,則選擇6M的胍鹽酸(guanidine?HCl)或8M的尿素(Urea)來溶解,然后稀釋到需要的濃度。


問: 如何保存多肽?

答: 1. 為了方便儲存及后續使用,建議將多肽溶解至濃度為1-2 mg/ml左右。

2. 為了防止或盡量減少多肽降解,請將多肽以凍干粉形式保存在-20°C,-80°C更佳。如果需要保存溶液肽,最好分成小樣存放,以避免反復凍融。一份樣品融凍后未用完,應扔掉。細菌降解有時會成為溶液肽的麻煩,所以請將肽溶于無菌水或肽溶液過濾除菌。

3. 多肽序列中含有甲硫氨酸Met(M),半胱氨酸Cys(C)或酪氨酸Tyr(Y),建議保存于無氧環境防止氧化。


問: 如何選擇適合自己研究的多肽純度?

答: 粗品肽不推薦用于生物實驗。粗肽可能含有大量的非肽類雜質,如殘留的有機溶劑、清除劑、TFA和其他不完整肽。TFA不能被完全消除,通常交付的肽以TFA鹽的形式存在。如果殘留的TFA影響您的實驗,我們推薦其他鹽形式,如醋酸鹽和鹽酸鹽等。這些鹽通常比常規TFA鹽貴20-30%以上。這是由于在轉化過程中出現更多的肽損失和需要更多的原材料。


NovoPro建議對各種項目采用以下級別的肽純度:


多肽純度

適用項目

>70% 肽純度

肽微陣列
層析法
酶聯免疫吸附試驗檢測抗血清滴度

>80% 肽純度

免疫印跡法(非定量)
酶底物肽(非定量)
多克隆抗體制備
親和純化

>90% 肽純度

NMR研究
質譜分析
單克隆抗體制備
磷酸化檢測

>95% 肽純度

ELISA試驗和RIA(定量)
受體配體相互作用(定量)
體內、體外 生物活動測定
酶的研究和阻斷實驗(定量

>98% 肽純度

NMR研究
藥物活性成分
X-ray晶體研究
其他敏感的生物檢測



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