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收到多肽后該如何處理和保存多肽?

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收到多肽后該如何處理和保存多肽?

發布日期:2019-09-25 作者: 點擊:

凍干粉形式的多肽,經密封包裝可在常溫條件下穩定運輸,溶解狀態的多肽不宜長期保存。


多肽保存指南:需要長期保存的多肽,應以凍干粉形式存放在含有干燥劑的密封容器內,置于-20℃保存,-80℃效果更好,可以最大限度地避免多肽降解。這種儲存方式可以使多肽可保存數年,避免了被細菌降解和氧化,也可以避免二級結構的形成。


打開包裝: 在打開包裝和稱重前,請先將多肽在干燥器中平衡至室溫。因多肽往往具有吸濕性,未經平衡到室溫的多肽在打開蓋子后易凝結,從而降低了多肽產品的穩定性。


稱重: 迅速稱取您所需的多肽,并將剩余多肽繼續儲存在-20°C或更低溫度。與其他多肽相比,含有半胱氨酸、蛋氨酸、色氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺和谷氨酸N -末端的多肽保存期更短。


問: 什么是多肽的純度?

答: 多肽的純度是指HPLC方法在214nm處檢測到的目標多肽的含量(214nm是肽鏈的吸收波長),紫外分光光度計檢測不到水和殘留的鹽分。但可發現其他的雜質包括:缺失序列(缺失了一個或多個氨基酸殘基的靶序列),截斷序列(加帽過程中產生的序列)脫保護不完全序列(產生于整個合成過程或最后的裂解過程)。


多肽純化不涉及水和鹽。HPLC純化會產生少量的TFA,如:游離的氨基末端和其他側鏈如Arg、Lys、His都可生成少量TFA雜質。通常交付的多肽多含有微量TFA和殘留水。即使處于凍干狀態,水也會因共價結合的能力不同而不同程度地存在著。


在多肽中還存在哪些物質(雜質)?


雜質

純化前的多肽

純化后的多肽(HPLC)

缺失序列1

Y

Y

截斷序列2

Y

Y

脫保護不完全序列3

Y

Y

裂解過程中被修改的序列4

Y

Y

DTT (dithiothreitol,二巰基蘇糖醇)

Y

N

TFA (trifluoroacetic acid,三氟乙酸)

Y

Y

Acetic acid(醋酸)

Y

N

某個氨基酸發生了副反應的多肽,如脯氨酸異構化等。

Y

Y

純化前的多肽中包含的雜質包括多肽和非多肽物質, 純化后的多肽中包含的雜質除了TFA鹽,大多數為序列被修改的多肽。


缺失了一個或多個氨基酸殘基的靶序列

為避免缺失序列的產生而進行的加帽操作,截斷序列即產生于加帽過程中

產生于整個合成過程或最后的裂解過程

保護基重新附著在多肽的其他位置

問: 紐普生物如何對合成的多肽進行質檢?

答: 所有合成肽都經過HPLC和MS分析,并提供相應的檢測報告。所有多肽均采用反相色譜法純化,以質譜法測定肽的分子量來確定產品是否正確,MS檢測結果還可顯示大部份的主要雜質。如果必要,還可提供肽凈含量檢測,如氨基酸分析或元素分析。這些方法可以證實多肽的氨基酸組成,他們均可作為多肽確認的補充方法。所有交付的肽均達到了客戶要求的純度。沒有達到純度要求的那些多肽均被丟棄。當然如果客戶需要,也可以發送給他們。


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